首页%『摩鑫注册』%首页蒋氏紫砂 百年传承 重塑辉煌——论“蒋氏紫砂”的起源、兴盛及传承的艺术历程.pdf

　　蒋氏紫砂 百年传承 重塑辉煌——论“蒋氏紫砂”的起源、兴盛及传承的艺术历程.pdf

　　蒋氏紫砂 百年传承 重塑辉煌——论“蒋氏紫砂”的起源、兴盛及传承的艺术历程

　　蒋兴宜 1958E．．--4月生 浙江省工艺美术大师 ，高级工艺师 。 1979年进长兴紫砂 厂 ，师从蒋淦春、蒋淦勤 ，专业从事紫砂 工艺品设计 创作 ：199o~在 宜兴紫砂 工艺厂跟 随姑妈 … 著名 工艺美术大师 蒋蓉 进行创 作 ：2∞O年起 自创 “蒋兴 宜紫砂艺术工作室 ”专业从 事紫砂工艺 品设计制作 至 今 。 2007年4月 “马上 封侯 壶”获省农业厅 、杭 14市人 民政府颁发 的银奖 ； 2009年7月 “品方提梁 壶”获首届浙江省精 品博 览会金奖 ：2009年7月 “品方 提梁壶”获省经济和信息化委 员会精品奖 ：2olo~5月 “荷塘莲语 壶”获浙江 省工艺美术精品博览会金奖 ：2011年9月 “生命之源壶”获 江苏省第 ：届 中国 宜兴紫砂原创 专制作 品评 比金奖 。2012年参加 由中国非物质 文化 遗产保 护 中 心、浙江省 文化厅主办 的 “非遗薪传——浙 江传 统塑艺陶艺精 品展暨 中青年 十大名师 ”评选活动 ．获 得 “非遗薪传——浙 江传统塑艺 陶艺精 品展 ”金奖 和 十大 名 师 的称 号。 — — 论 “蒋氏紫砂的起源、兴盛及传承的艺术历程 I文，蒋兴宜 摘 要：长兴与宜兴紫砂。矿源一脉相连，制作技艺也是一脉相承。蒋 氏一族祖居宜兴川 潜洛，以制花器壶与仿生雕塑器玩件见长，已有上百年传承史。上世纪中叶 “蒋氏紫砂” 人迁居长兴，成为长兴紫砂艺术发展扛鼎的领军人物。他们和长兴的紫砂艺人肩并肩，携手 同开创出了长兴紫砂与宜兴紫砂 “比翼双飞”的新局面，为繁荣紫砂创作、弘扬陶瓷文化所 出了不懈努力。 关键词：蒋氏紫砂 艺术特征 传承 艺术历程 引言 “蒋氏紫砂”发端于清代，在中国紫砂艺术界独树一帜。蒋氏祖居宜兴潜洛，世代以 紫砂为业，有资料可佐的 蒋“氏紫砂”至今已有上百年的传承史。 “蒋氏紫砂”发展到 20世纪的5O年代中期，隶属于 蒋“氏紫砂”分支蒋鸿泉一脉的后人，除了蒋蓉 (蒋鸿泉长 女)留在宜兴，蒋蓉之弟蒋淦芳、蒋淦春、蒋淦勤三兄弟先后迁居长兴，成为长兴紫砂艺 术发展扛鼎的领军人物。 长兴，有着丰富的矿产资源，与宜兴丁山黄龙山的紫砂泥为同一矿脉，主要分布于箬 溪源头五通山脉的丘陵岩石层中，尤以光耀、合溪、白岘矿最为量多质优：长兴，有着紫 砂陶器制作的悠久历史，北宋时就与宜兴一样生产原始的紫砂器，只不过宋以后宜兴开始 独立生产紫砂器皿，到明、清时形成规模，长兴陶瓷业则仍以生产日用陶瓷为主，民间紫 078 O79 砂器皿制作虽有遗存却鲜有记载。解放后，在党和政府的重视 鸿“禧”两字。整器采用方器泥片镶接法成型，工精艺高，既有 下，长兴紫砂得以恢复并得到长足发展，宜兴的多位紫砂名家 传统的古朴意蕴，又有创新的典雅美感。 尤其是 “蒋氏三兄弟”也慕名而来，和本地的紫砂艺人一起， 2O世纪初期，上海著名的陶器商号 铁“画轩” 创办人戴国宝 揭开了长兴紫砂发展的新纪元。 (1870--1927年 )，转营宜兴紫砂也是最先找到宜兴潜洛，选定 曾祖帮他做壶并合股经营的。戴国宝，南京人，是位刻瓷名手， 一 、 “蒋氏紫砂” 宜兴潜洛溯源 以铁针凿刻花纹于瓷器成名。戴国宝与蒋祥元合作，创紫砂艺人 宜兴历史上的紫砂发祥宝地主要有三处，最为集中的是宜 与书刻高手合作的又一佳话，也使得 “蒋氏紫砂”从浩如烟海、 兴蜀山地区，另两处则分布在丁蜀镇北的川埠上袁与潜洛两 默默无闻的 “乡坯”中脱颖而出，并在大上海崭露头角。 地。旧时的潜洛村 ，村上人除了种少量难以养家糊 口的薄地， 大多有做紫砂的--N好手艺活儿以挣钱贴补家用，世代沿袭着 2．祖辈一代 “蒋氏紫砂” 艺术特征 “家家做陶、户户制坯”的生活惯例 ，以致成为著名的紫砂传 我的祖父蒋鸿泉(1896--1946年)是位老实本分的艺人，他继承 统产区。因此 ，与其说这里是农村乡间，还不如说是紫砂窑场 了 “蒋氏紫砂”的传统 更为妥帖。世居潜洛的蒋家，与村上大多数人家一样 ，做紫砂 工艺 ，并传授给儿女 陶成为他们的主业，手艺，成为他们谋生的看家本事。 们，是我的姑妈蒋蓉、 潜洛东近蠡河，南临丁、蜀，虽处水乡平原却水陆交通便 父亲蒋淦芳及两位叔父 利人31众多，从陶的人气旺盛。潜洛原有七个庄，后并为一 的启蒙师傅。他善制光 村，各家各户作坊里需要的紫砂矿土原料、烧窑用的柴禾，均 器和雕塑，我至今仍珍 可以船载车驮的方式直接运到村上。清末，潜洛村东、西、北 藏着他制作的动物雕塑 面 ，就各有一座专用于烧造紫砂器皿规模较大的龙窑 ，其东 狮“子狗”和一件 “洋 窑、西窑就在蒋家祖居的潜洛六庄东、西两面，北窑在潜洛七 桶壶”(见图2)。该壶 庄。其时窑场的景象十分壮观，烟云袅袅升腾，天暗下来从龙 身筒呈圆柱形，三弯形 窑鳞BPSI#里喷出的火焰像火龙飞舞，映红了半片天空和整个村 嘴出水流畅，嵌盖上的 图2蒋鸿泉作 “洋桶壶” 庄 壶钮为桃形，自然生动又别出心裁。 我的伯祖父蒋鸿高 (1894—1945年)，号志臣、鸿鹄(皋)，亦 1．曾祖一代 “蒋氏紫砂”艺术特征 名燕亭(庭)、彦亭、夔庭。他机灵活络善交际，自幼承家学庭 我的曾祖父蒋祥元(1869--1941年)，自号 “铭远主人”，幼 训，随父练就--N高超的制壶功，又博采众长，从友习得过硬的 时即随父学艺，善制花器与方器。清光绪十五年(1890)应商家要 雕塑技，擅制水盂、水滴、文房、杂玩等项紫砂器，二十多岁就 求仿制陈鸣远款方壶，因只闻其名未见实样和具体名字，只能 在上海滩古董圈里闯荡，为古玩商仿制 “大彬”、 “友泉”、 自创并自刻 铭“远”方印，传世作品有 “四方桥顶壶” 、 “四 “鸣远”等人的紫砂古器。说是仿古，其实原物存世极其稀有， 方鹅蛋壶”等。笔者珍藏着一件鸿禧款 桥“顶壶”(见图1)，是 好些是他原创的 “杰作”，反正几百年前真正的样式谁都不知就 曾祖受聘于 “阳羡 里，以致有人竟混淆搞不清是真是假，还真把他做的这些仿古壶 当作是古人的 “真迹” 。他为上海 铁“画轩”陶器行制壶，是供 紫砂陶业公 司” 时制作，此壶材质 应素坯最多的一位艺人。他创制的 牧“童骑牛壶”、 “东坡玩砚 为上乘红棕泥，色 壶”、 “陆羽茶经 泽朱红透紫，颗粒 壶”等花塑器，一 细腻。壶身为四方 度成为 “铁画轩” 鼓形 ，饱 满又挺 的畅销 品。这件 括，四方圈足与高 图1蒋祥元作 桥“顶壶” “束柴三友杯 ” 颈上下对应，四方三弯形嘴舒展 ，四方带 “中飞” 的环形把灵 (见图3)，亦是本 人的珍藏品。杯身 图3蒋鸿高作 “束柴三友杯” 秀 ，方正的压盖上设多转折的桥形钮，壶腹平贴用泥片拓印的 取 自然界松竹梅之形捏制，斑驳陆离的肌理逼真，古色古香，艺趣横生，把梢下有他的一颗 印章。 3．父辈一代 “蒋氏紫砂” 艺术特征 我的姑妈蒋蓉 (1919--21：)08年)是—位继承传统又开一代新风、为创当代仿生象形花塑 器作出了杰出贡献的紫砂 “女泰斗” 。她热爱生活，效法 自然，大胆创新，以莲荷、瓜 果、花卉、蛙蟾等作为艺术创作的素材，塑造出了一件件形象逼真、生动传神、具有江南独 特风韵的传世杰作，如 “荷花茶具” 、 牡“丹壶” 、 “佛手壶” 、 “荸荠壶” 、 百“果 壶” 、 西“瓜壶” 、 石“榴壶” 等，可谓是件件巧夺天工，艺术风格鲜明，具有浓郁的 个性特征和强烈的艺术感染力。 我的父亲蒋淦芳作为 蒋“氏紫砂”的传人，继承蒋氏风格，所作形体朴茂，格调高古。 父亲制作的这件 高“山流水” 水注(见图4)，取 《列子 ·汤问》中 “高山流水” 的典故为 素材，采用花塑工艺捏塑而成。俞伯牙席地而坐，一手肘抵山石掌托腮帮，一手按压在双膝 面横放着布卷捆绕的琴身上，袖口一孔用以注水进去，撑住石块粗壮的树干形嘴劲挺。整器 结构精巧分明，衣皱纹饰线条流畅，人物形态生动自然，品赏时仿佛真有 “伯牙弹琴、乐曲 高妙”的意境生成，恰如钟子期所言，是 “善哉，峨峨兮若泰山!洋洋平若江河 !” 我的 — 叔父蒋淦春、蒋淦勤，都是当代紫砂的高手名师，他们的作品工艺精湛，形态生动，尤其是 图4蒋淦芳作 “高山流水”水注 花塑器作品，色泽朴雅，清新明丽，为藏家所争相收藏之珍品。 二、 “蒋氏紫砂”传人长兴迹踪 长兴地处淅江杭嘉湖平原西北部，是长江三角洲之腹地，历史悠久，人文荟萃，资源丰 富，和同处在太湖西岸的江苏宜兴共连着一脉紫砂矿。自清发端的 蒋“氏紫砂”，很早就在 这一带畅销。父亲在1955年就来到浙江，在长兴陶瓷工场的紫砂车间从事陶艺创作，两个叔 叔也分别于1959年、1962年来长兴，在由紫砂车间扩转成的长兴紫砂工艺厂辅导学徒，传授 紫砂制作技艺。大叔蒋淦春先后担任紫砂厂筹建顾问和创作组长，是新中国成立后长兴紫砂 的创始人之一，以制作花器见长，作品自然生动，屡获省优、部优荣誉，曾被中央领导选作 礼品赠送外宾i小叔蒋淦勤，中国陶瓷艺术大师，1956年考入 “宜兴紫砂工艺学习班”， 师从七大 辅“导” 之一的王寅春学艺，1958年进南京艺术学院深造，毕业后留校，不满一 年作为浙江省从江苏选调人才之一，开始致力于长兴紫砂陶艺的复兴，先后担任长兴紫砂厂 技术副厂长和长兴紫砂艺术研究室主任等职，也是新中国成立后长兴紫砂的创始人之一。 蒋“氏紫砂”传人兄弟仨，一起为发展浙江的紫砂陶艺、弘扬祖国陶文化贡献才智。 同时，在2O世纪50年代，父亲在参加苏州的一次文物展时，一眼发现展品中有关 “时大 彬、陈鸣远”的作品好些 面“熟”，原来是我伯祖父蒋鸿高(燕亭)在上海仿古时的原作 ， 并将保存的印章、工具等取来进行比对验证，后在征集文物展品时，这批蒋鸿高遗存留传下 来的作为 “文物”被苏州博物馆 借“”了去，我至今仍保留着苏博馆长当年写的 借“条”， 经多方查找，得知现已由南京博物院收藏。 三、 “蒋氏紫砂”艺术风格弘扬 作为陶器中的精华——紫砂器，早在宋代环太湖流域的长兴与宜兴地区，凭藉着天时地 利人和应运而生，尤其是当代，长兴凭借着有利的环境优势、资源优势和人文优势，许多紫 080 081 砂的 “名门” 之后，为振兴长兴紫砂从四面八方聚集来到了这片宝地 这件 “石榴提 上辛勤创作，和长兴的紫砂艺人肩并肩，携手共同开创出了长兴紫砂与 梁 ”(见图7)是 2O世 宜兴紫砂 “比翼双飞”的新局面。 纪90年代完成制作 本人1958年生于长兴的 蒋“氏紫砂”世家，幼年、童年、少年、青 的，壶身取一截石榴 年直至现今，均在长兴度过。1974年进长兴紫砂工艺厂学艺，知青上山 树段为形，带有树裂 下乡时到长兴农村插队，于1979年上放进厂，师从叔父蒋淦春、蒋淦勤 纹的嵌盖与壶身合为 从事紫砂艺术创作，并常回宜兴随姑妈蒋蓉进行创作实践。我的由衷心 一 体。壶嘴与提梁把 愿是自己作为在长兴扎根落户的蒋氏后人，能将 “蒋氏紫砂” 的艺品 似从树段上 自然生 艺德在浙江发扬光大、再创辉煌，为促进祖国陶文化的繁荣尽心竭力、 成，从壶嘴、提梁伸 添砖加瓦。从艺以来，也先后创制了一批 “蒋氏紫砂”艺术风格特色鲜 延与壶身相接的枝条 图5石榴提梁壶 明的仿生象形花塑器作品。 上，翠叶、红果与含 1．柏树提梁壶 苞待放的花蕾生机勃发地贴塑于壶身。五月榴花正红，也 这件 “柏树提梁 ”(见图5] 是知了从泥土里钻出来的时候，一只爬上树未蜕衣的蝉在 ， 是20世纪90年代初完成的一件 盖面成钮。整器巧配五种色泽的泥料，以花器捏塑工艺进 塑器作品。广泛汲取柏树品德高 行造型，老干新枝虬曲，树结疤痕累累，既源于 自然又高 雅的多元成分构思塑型，将提梁 于 自然，生活气息浓郁。该作品于2000年参加解放后第一 把设计成前 中式不规则形，使之 次在杭州举办的西湖博览会，获首届中国工艺美术大师作 充满 “无所畏惧”的气势和 “生 品暨工艺美术精品博览会优秀创作奖。 机盎然”的动感。整器形态生动 逼真，壶把与壶身、嘴形成的虚 IllS柏树提梁壶 结语 实对比既协调又强烈，最主要的是把柏树的那种大度、豪迈、高尚的英 综上所述，发源并兴盛于太湖西岸历史悠久的紫砂陶 勇气概和气韵抒发了出来。该作品在1994年浙江省首届陶瓷艺术设计创 艺，倍受世人青睐。长兴与宜兴山相邻、水相依、人相 作评比中，荣获一等奖。 亲、艺相同，长兴紫砂与宜兴紫砂同源同宗，是中国陶瓷 2．高岁寒三友壶 艺苑里盛开的两朵 “姊妹花”，长兴紫砂的发展，有着诸 “岁寒三友”是紫砂创 多得天独厚的优势。现在，随着长兴紫砂陶艺创作力量的 作的传统题材 ，自明、清时 不断壮大，我们作为 “百年蒋氏紫砂”～族的传承人，又 代就多有出现。这件 “高岁 是最早落户浙江从事紫砂创作的 “名门”之后，肩负的责 寒三友壶 ”(见图6)另辟蹊 任更重。我坚信 ， “蒋氏紫砂” 的后人定会发挥表率作 径，充分利用 五“色土”和 用，在浙江的这片大有用武之地的土地上不仅落地生根， 花塑工艺的特性，围绕、突 还将开花、结出更为丰硕的果实，为重塑 “百年蒋氏紫 出 “高大”塑造器形。壶身 砂” 的艺术辉煌和促进长兴紫砂的繁荣兴旺，作出更多更 取源一截长条形松段，翠翠 大的贡献。 生生的竹形嘴沿壶身自底往 图6高岁寒三友壶 上生长，挺拔灵秀，壶把为梅枝形，曲折攀缓，把端分权，嵌盖与壶口 参考文献： 齐平吻合，弯曲的松枝与一只松鼠巧妙地成为壶钮。壶身上贴塑着竹 I1l徐风： 《花非花——紫砂艺人蒋蓉传》，人民文 叶、松针和梅花，几只活泼的小松鼠穿梭其间，别有风韵。整器以神奇 学出版社，2(}06年 ．． 的紫砂材质和花器工艺，把松竹梅的肌理质感和大 自然的丰富多彩维妙 I21夏俊伟、韩其楼： 《中国紫砂茗壶珍赏》，上海 维肖地以紫砂壶艺的形式表现了出来，让人们在品赏时耳 目一新，赋予 科学技术出版社，2(106年 、 的诗情画意更让人流连忘返。 l3】浙江省博物馆 、长兴县博物馆 ： 《紫玉金砂—— 浙江长兴紫砂茗壶精萃》，中国书店，2012年。 3．石榴提梁壶 热带作物学报 2014，35(10)：1969—1974 ChineseJournalofTropicalCrops 番茄S1ARF2基因表达模式及其 在果实发育中的功能分析 杨 枭，任振新 ，林冬波，先志强，李正国 妻重庆享市高校功能鑫基篙因蔫与簧调控囊新技术重点实墓验室 重王庆400030 摘 要 为 了分析 SlARF2基 因在番茄生长发育过程 中的功能．利用定量 PCR技术分析 SlARF2基 因的表达模 式，发现SlARF2基 因在番茄花芽中表达量最高，在幼果 中次之 ，说明SlARF2基 因可能在番茄花果发育中起着 重要作用。为进一步研究 SlARF2的功能 ，构建 S1ARF2基 因超表达 、抑制表达载体 ，农杆菌介导转化番茄成功 获得了相应转基 因植株 。通过与野生型番茄植株花 、果不 同时期 的表 型进行 比对分析 ，发现 SlARF2基 因的超 表达对花的形态学特征无明显影响 。但能够显著提高植株的结实率、降低果实大小和重量。说明 sA／RF2基因 参与调控番茄花、果发育过程 。 关键词 番茄 ；SA／RF2；表达模式 ；果实发育 中图分类号 $641．2 文献标识码 A TheExpression Pattern ofSIARF2 in Tomato and the FunctiOn Analysisin Tomato FruitDevelopment YANG Xiao，REN Zhenxin，LIN Dongbo，XIAN Zhiqiang，LIZhengguo GeneticEngineeringResearchCenter,SchoolofLfieSciences，ChongqingUniversity／KeyLabofFu~twndGene andNewRegulationTechnologiesof ChongqingMunicipalEducationCommission,Chongqing400030,China Abstract To investigate thefunction ofSbtRF2 in tomato development，weanalyzed the expression pattern of S 足 by Real—time PCR．We ofund thatS／ARF2 washighly expressed in tomato bud and immature fruit． suggestingthatSlARF2playsan importantroleintomatoflowerand fruitdevelopment．Furthermore，we constructed SlARF2 overexpression and suppress expression vectors．By agrobacterium infection，we finally obtained the SlARF2 overexpression and suppress transgenetic tomatoes．Compared the transgenetic tomatoes to wild type tomato，we found thatSlARF2 had no affection in hte morphology offlower，however SlARF2 overexpression strongly enhanced the rape rate oftomato and decreased hte size oftomato furit．1’I1e study demonstrates that SlAR1；2 regulates hte developmentoftomato flowerand furit，and providesbasic reference forfurtherstudy of ．s F2 function． Key words Tomato；SlARF2；Expression pattern；Furitdevelopment doi 10．39690．issn．1000—2561．2014．10．015 生长素是植物生长激素 中最为重要 的一种激 拟南芥、土豆 、水稻、葡萄ARF家族成员的蛋 白 素．通过调节早期生长素响应基因的表达 ．调控植 质序列 比对分析 ．建立系统进化树 ．将ARF家族 物生长发育的多个阶段如 ：顶端优势、向性生长 、 划分为 四个分支 。其 中。ARF Ia。IIb，IIIand 侧根 的形成、微管的分化、胚胎发育等[1]。在早期 IV 亚家族基 因的蛋 白中间区域含有一个抑制功能 生长素响应基因的启动子区域包含一个保守的顺式作 域 ．推测这些亚家族 的ARF蛋 白为转录抑制子 。 用元件 TGTCTC．称为生长素响应元件 (AuxRE)园。 ARF2基因属于 ARFIa亚家族成员 ．作为一个潜 能够与该元件结合并调节生长素响应 的一种转录因 在的生长素负调控转录因子 ．已经在多种模式植物 子称为生长素响应因子 (auxinresponsefactorARFs) 中被克隆研究。在拟南芥 中， 突变体表现出对 ARFs是植物生长素信号途径 中一个重要的转录因 植物生长发育多向性 的调节影 响，包括植株变大、 子 ．它正向或者反 向的调控生长素相关基因的表 组织形态异常等[61ARF2基 因在植物生长发育的 达 ，从而调控植物生长发育过程3[]。通过对番茄、 多个阶段都有表达 ， 突变体在植物衰老的多个 收稿Et期 2014—04—20 修 回日期 2014—09一O1 基金项 目 国家863课题 (N0．2012AA101702)；国家 自然科学基金(N0；重庆市重点自然科学基金项 目(No．2011BA1024)；教育部 博士点基金 (No．029)。 作者简介 杨 枭 (199O年一)，男，硕士研究生；研究方向：植物激素信号转导。}通讯作：i~(Correspondingauthor)：李正国(LJZhengguo)， E-maih ．cn。 一 1970- 热 带作 物 学报 第 35卷 过程中均表现出明显的延迟现象，包括花的脱落． Template≤200ng．PrimeSTAR HS DNA Polymerase 叶的衰老以及角果 的成熟 。有研究发现 ．arf2突 0．5 L，加 ddH2O至 50 L。PCR产物经胶 回收后 变能促使组织细胞分裂增强， 突变株系中。茎 连接至 pEASY—Blunt克隆载体 。测序验证 测序 和莲座 中与细胞周期相关的 CYCD3；基 因和与细 结果通过 DNAMAN软件与拟南芥ARF2基 因序列 胞分裂相关的ANT基因表达时期都被相应的延长． 比对进行相似性分析 ．通过 NCBIBlast进行蛋 白 说明AR 是一个细胞分裂和组织发育的抑制因 序列结构功能域分析 子8[]。ARF2还介导生长素与其他植物激素的互作 1．2．2 组织表达模式分析 Triz0l法提取番茄各组 乙烯可 以通过蛋 白酶体途径介导ARF2蛋 白的降 织器官总RNA，组织器官分别为根 (R)、茎 (S1、叶 解 ．并且该过程与 乙烯促进生长素的合成途径是相 (L)、花芽(B)、花(FL)、幼果(IM)、绿熟(MG)、黄果 互独立的[9．101在生长素和 ABA交互通路 中ARF2 (YF)、红果 (Re)。OD 0D2 1．8~2．0，以2I．LgRNA 与HB33作为新型的调控因子 ．对植物生长起着重 为模板 ．经DNaseI消化 30min后反转录合成第 要的调控作用n【] 油菜素 内酯 (BR)调控通路 中的 — — 链 cDNA，以弓I物ARF2一F，ARF2一R，SlActin—F， 重要基因BIN2磷酸化会导致ARF2的DNA结合和 SlActin—R[1】](表1)分别扩增 目的基 因和 内参基 因 抑制能力缺失 ．BIN2通过钝化 ARFs增强生长素 按照 MaximaSYBR Green／FluoresceinqPCR Master 诱导基 因的表达 [12】。ARF2对番茄生长与发育具体 Mix(2X) 125 L，ForwardPrimer0．3wmol／L，Reverse 的调控功能．尤其是对花和果实发育的作用至今仍 Primer0．3~mol／L，cDNA≤100ng．力ⅡddH20至 不清楚 。本文以番茄 IsIARF2基因作为研究 目标 ． 25 L反应体系进行扩增反应，为了确保结果的可 分析其在番茄花与果实发育中的功能 ．以期为明确 靠性 ，每个反应设置 3次重复。PCR程序设置为 ： 番茄 SIARF2的发育调控功能奠定基础 50℃ 2min；95oC 10min；95cI= 15S，60oC 30S， 72℃ 30S．40个循环。PCR扩增结束后立即进行 1 材料与方法 熔解曲线分析．以验证扩增的特异性 熔解 曲线cc开始 1．1．1 植物材料 番茄 ‘册z册 lycopersicum．CVMicro 每升高 0．5℃保持 10S．连续升高 80次 。数据处 Tom)、大肠杆菌 JM109和农杆菌 (Agrobacterium) 理 ：实 时荧光定量 PCR反应完成后 ，iCyclerMT 菌株 C58由本实验室保存 softwareversion3．0自动计算出各个板位的CT．将 1．1．2 试剂 T4DNA连接酶 、限制性 内切酶及反 CT值输入到Microso~Excel2003中．按照公式△ 转录试剂盒购 自Fermentas公司 (USA)，PrimeSTAR ACT=[(C Target-CT Reference)sample A-(cr 高保真 DNA聚合酶购 自TaKaRa公司(大连)，质 Target—CTReference)sampleB11l【3】，采用 2-AACT法分 粒提取试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒购 自OMEGA 析定量数据 ．计算基因的相对表达量 ．并绘制基因 公司(USA)，总RNA抽提试剂Trizol购 自Invitrogen 表达差异 的柱形图。其 中．CTTarget表示 目的基 公司(USA)，其他生化试剂购 自鼎国生物技术有限 因的CT值 ．CTReference表示内参基 因的CT值 公 司f北京 1，Real—timePCR所 用 试剂 Maxima⑧ 表1 本实验所用到的引物序列 SYBR Green／FluoresceinqPCR MasterMix(2X)购 自 Table1 Theprimesusedintheexperiments Fermentas公司(USA)，用于番茄组织培养的MS培 养基购 自Sigma公司：所有引物合成和测序工作均 引物名称 引物序列 5-3 由南京金斯瑞生物科技有 限公司完成 F1 CGCGGATCC(BamHI)An’AGTGTACGGAAATGGCTGC R1 GGCTCTAGA(XbaI)CGTGATCCTAAGATTCTGCITI’G 1．2 方法 Fs CGCTC AGA(baI)AGACCGAG兀-FCACCGTGG 1．2．1 ARF2基 因的克隆及序 列分析 Trizol法提 Rs CGCGGATCC(BamHI)TCTCCCCGCATITGATAGG 取番茄各组织器官总 RNA，ODz~olOD~o=1．8～2．0， AR 一F GCAAGGTCAAGAGTrATCGA 以2 gRNA为模板 ，经 DNaseI消化 30min后 A 2一R CATTGGTITCTCAGACAAGTC 反转录合成第一链 cDNA(步骤参照说明书) 取各 SlActin-F TGTCCCTAITITI1ACGAGGGTTATGC 组织 cDNA等比例混样 ．以之为模板 ，以引物 Fl， JsM ctin—R AGITAAATCACGACCAGCAAGAT R1(表 1)，高保真DNA聚合酶扩增 ．s／ARF2基因。 加样 比例为 ：5xPrimeSTAR Buffer10lxL．dNTP 1．2．3 植物表达载体 的构建 克隆S1ARF2基 因 Mixture(2．5mmol／L1，引物1、2各 0．2～0．3Ixmol／L， 全长 时．在引物 F1的 5端设计加入 BamH I酶切 第 l0期 杨 枭等 ：番茄S RF2基因表达模式及其在果实发育中的功能分析 一197l一 位点 ．在 引物 F2 的 5端设计加入 Xb口I酶切位 1．2．5 植物表型鉴定 结实率=所收获的果实数／ 点。克隆得到具有 BamH I、XbaI双酶切位点的 开花数。番茄果实直径大小用游标卡尺测量。 全长基因。BamH I、XbⅡl双酶切处理 DCAMBIA一 1．3 数据处理 35S载体 。37qC，1h，胶 回收纯化。T4连接酶连 所得数据用 Excel进行方差分析 ．最小显著差 接 处理过 后的 S 基 冈片段 和 DCAMBIA一35S 数法 (LSD法)进行显著性分析，每个数据样本nI5， 载体 ，16oC过夜 ，转入大肠杆菌 菌落 PCR筛选 不同的字母代表差异显著 ， 代表差异极显著． 鉴定 阳性 克隆 ，提质粒 ，得 到 pCAMBIA一35S— 代表差异显著 S1ARF2超表达载体 。选取全长基因中约 600bD的 基因片段 ．设计 引物 Fs和 Rs．在 Fs的 5端设计 2 结果与分析 加 入 Xb I酶 切 位 点 ．在 Rs的 5端 设 计 加 入 2．1 A足F2基因的克隆与结构功能域分析 BamH I酶 切位点 克 隆得 到的基 因片段连接至 以番茄总 RNA反转录成的cDNA为模板 ．用特 BamH I、 6ⅡI双酶切 处理 的pCAMBIA一35S载 异性引物 F1和R1进行PCR反应 ，得到约2560bp 体。筛选阳性克隆，提质粒，得到pCAMBIA一35S— 的片段 (图 1一A) 将测序结果与数据库 中番茄 asARF2反义抑制载体 1．2．4 转基 因植株获得及鉴定 叶盘法转化番茄． SlARF2基 因 比对 ．确认 所得 片段为 ARF2基 因 经卡那霉素抗性筛选 ，GUS报告基 因染色筛选 ． 番茄A尺 基因与拟南芥 A尺 基因的蛋 白质序列 初步获得阳性转基因植株l14l转基因植物 S 尺 比对 ．相似性为 61．7％．2个基因都含有 3个明显 基因表达量鉴定 ：取各植株同一时期植株叶片提取 的 保 守 结 构 功 能 区 域 Domain I、Domain II、 RNA反转录 cDNA．以之为模板进行定量 PCR检 DomainIII(图 l—B)，这 3个保守结构功能域分别 测 (具体步骤见组织表达模式分析)．得到各株 系 为 B3一DNA结合 区域 、Auxinresponsefactor生长 ．sA／RF2基因表达量 ．以野生型 中LsA／RF2表达量 素响应区域以及AUX／IAA家族基因转录激活区域 ． 为 1。确定转基因植株是否超表达或抑制表达 属于典型的ARF家族保守结构功能域 A bp AtARF2seq脯孽 嚣爱 灌薏嗣_ 翻 hn (”‘ ““s ” 。 窜 。 = d 。iy 1 。#l ： 500o ARF2, 2560 t 30oO AR ． se圈重罾l蛋羹莲冒雷舞羞薏曩薯目匿薯薏聋薯鐾羞l Ij Co[1s{~nsus ：pq0 ：eqVea ： aqqxq=l p5 lc：V V lae0：deVYaqtl e：qde~a ke FF ：fvh 2000 AtARF2．seq 243 BIARF2．seq 225 Consensus sf k：lc^，卷：3tn口口t， 1r： ade0l 1衄 31a窄C0qtiv^kdlh nt zfzhlf=a口口r! lla3avSVfVS$~rIV lx【M】 750 AtARF2．seq 324 BIARF2．seq 3o6 Consensus AtARF2．seq 405 BlARF2．seq 387 Consensus tARF2． -ARF：． se,I嚣匿孽圜量重 墨耄薏 _ 薏善莲蘧霪墨酒耄童飘；222 IARF2． 。 ． se墨孽 塞墨葚I ：曩饕童疆 嚣疆重童溜耄渭 l ； IARF2．se 。 Fz． 。 誊亳 谭蘧篡羡强鬈曼蘧霪童蘧稍 鬈 凄 蓉 瑁643 IARF2．s ． 州eq善意懑；翟暖誉 器瓢 i圜薯■ 嚣誊 AtARF2．seq 795 BIARF2．seq ； 782 Consensus AtARF2．seq BIARF2．seq Consensus 图1 SfAR 基 因扩增及结构功能域分析 Fig．1 ThecloningandtheFunctionDomainanalysisofARF2Gene 一 1972一 热 带 作 物 学报 第 35卷 2．2 SIARF2植物表达载体的构建 表明，基因序列及连接方 向正确 。表 明成功构建 将带有酶切位点的S1ARF2全长基 因和 中间 了SlARF2超表达载体 pCAMBIA一35S—SIARF2和 片段 ．连接 至酶切处 理 的 pCAMBIA一35S植物 表 反 义 抑 制 载 体 pCAMBIA一35S—asARF2(图 2)。 达载体 ，转化 大肠杆菌 ，经 PCR、酶切验证 。 通过冻融法将成功构建 的表达载体转入农杆菌 确定 目的片段 已成功 的连接到载体 。测序结果 C58中。 pCAMBIA—-35S—-asARF2 图2 SIARF2植物表达载体的构建 Fig．2 TheconstructionofSIARF2expressionvector 2．3 SIARF2基 因在番茄各组织中的表达模式分析 育过程 中的功能 ．设计构建 ．S／ARF2基 冈的超表达 定量 PCR分析 SA／RF2的表达模式 结果发现 及反义抑制载体 ．通过遗传转化成功获得了4个超 在番茄根、茎 、叶营养生长阶段 S 尺 的表达量 表达转基 因株 系 ，ARF2—1、ARF2—3、ARF2—4、 呈明显的上升趋势．在根中表达最低 ．茎的表达量 ARF2—5和 1个反义抑制转基 因株系 As—ARF2 提 约为根中的 l0倍 ．叶的表达最高 ．约为根中的 13 取各转基 因植株 60d的叶片 RNA．反转录得 到的 倍 进人生殖生长阶段后的花芽期达到最高 ．约为 cDNA．定量 PCR检测各个植株 的转基 因表达情 根 中表达量的 17倍 ．花和幼果时期的表达量有所 况 。结果表明．转基 冈株系 ARF2—1、ARF2—3中 下降，为根 中表达量的 12倍左右 ．在果实发育阶 A尺 基因的表达量较高．约为野生型表达量的 13 段 Js／ARF2的表达量 明显下降并趋于平稳 ．为根 中 倍 ．ARF2—4植株 S／ARF2的表达量较低 ，约为野 表达量的 5～7倍 (图 3)。由此推测 Ls 基 因对 生型表达量的 7倍 ．ARF2—5植株 的Js R 表达 番茄花以及果实的发育形成具有调控作用 量相对野生 型无 明显变化 ．反义抑制植株 As— ARF2中5 R 基因的表达量 明显降低 ．约为野 生型中表达量的0．5倍 (冈4一A)。通过统计植物开 15 花期各转基因植株的开花数量．并与相同生长条件 下 同时期的野生型植株进行对 比．结果表明．开 圜 醐 l0 花期各转基 因植株的开花数量基本一致 (平均每 株 25朵左 右 )．证 明ARF2基 冈表达量的差异并 器 5 不能对花的形成产生明显的影响 在番茄幼果形成期 ．对各转基因株系的结实率 O 进行统计 ，结果显示：4个SA／RF2超表达转基因株 R：根；S：茎 ；L：11-r；B：诧芽 ；FI：花 ； 系的结实率明显高于野生型植株．其中ARF2—3株系 IM：幼果 ；MG：绿熟 ；YF：黄果 ；Re：红果。 的结实率最高 ．ARF2—5次之 ．ARF2—4和ARF2—1 R：root；S：stem；L．1eaf；B：bud；Fhflower；IM：immature MG：Maturegreen；YF：Yellowfruit；Re：redfurit． 相对于野生型植株也相应增高 ．As—ARF2反义抑 图3 番茄S RF2基 因表达模式分析 制株系的结实率明显低于野生型植株 (图4一B)．．证 Fig．3 ExpressionpatternofSIARF2intoma~ 明S 尺 基因的超表达对果实座果有着一定的促 2．4 刚 基因在果实形成发育中的功能分析 进作用。进一步对成熟期果实进行统计分析。结果 为了分析番茄 ．s／ARF2基 因在番茄果实形成发 发现．各转基因株系的果实在数量 、大小以及重量 笫 10期 杨 枭等 ：番茄SfARF2基因表达模式及其在果实发育中的功能分析 一1973一 r兽 盟醐 《 目眦，÷ 涮林眯 上有着明显的差异 ARF2—加3的果实大m小、重量明O 大∞小、∞重量如的变加化成m明显0的线一E)。以 显小于其他各株系 。ARF2—4、ARF2—1株系 的果 上一数据表 明．随着 SlARF2基 因表达量 的提高 ， 实大小 、重量也明显小于野生型植株果实 。ARF2—5 转基因株系果实的大小和重量相应减小 株系以及 As—ARF2反义抑制株系的果实大小、重量 综上所述 ．在番茄果实发育过程 中SlARF2基 与野生型果实相比无明显变化 (图4一C、D：图5)。 因显著影响了植株的结实率 、果实大小和重量 ，证 同时S RF2基因表达量的变化与转基因植株果实 明A 基因是调控果实发育的一个重要因子 0-8 0·6 槲 04‘ O·2 0·0 1O 8 bo 面 6 4 2 0 大小) 重量 ) 20 I5 l0 5 O A：ARF2表达量 ；B：结实率 ；C：果实直径；D：果实重量 ；E：表达量与果实大小 、重量关系间的回归分析。 A：expressionquantitiesofARF2；B：ripeningrate；C：fruitdiameter；D：fruitweight：E：linearregressionanalysis． 图4 足 各株系果实表型分析 Fig．4 Analysisthephenotypeoffruit 一 l974- 热 带 作物 学报 第 35卷 异 ．同时各 S R 超表达株系的果实呈现圆润且 饱满 ．而野生型果实的底部明显尖细且果实呈心型 (图5)．这与同家族基因 5 尺 的研究具有一致 性I15_．从形态学分析 ．可能是 由于 SA／RF2直接影 响了番茄的细胞分裂所致 但结合结实率受影响这 一 结果 ．推测可能是因为5 R 基因在果实形成过 程中影响了营养的分配所致 ．对此尚有待深入研究 参考文献 【1]KumarR，Ty AK，SharmaAK，et ．Genome-widenaalysis ofauxinresponsefactor(ARF)genefamilyfromtomatoandanalysis oftheirroleinflowerandfruitdevelopment[J]．MolGenetC~nomics， 2011．285(3)：245—260． 2【】GuilfoyleTJUlmasovT，HagenG，eto1．TileARFfambYof transcription factorsand theirrole in planthormone—responsive transcriptionJ[]．CellMolLifeSci，1998，54(7)：619-627． 3【]GuilfoyleTJ，HagenG Auxinresponsehctors[]j．Curr()pinPlant Biol，2007，1O(5)：453-460． [4]TiwariSB，HagenG，GuilofyleT．Therolesofauxinresponse 图5 各转基 因株系番茄果实形状 factordomainsin auxin—responsive transcription[J]．PlantCell， Fig．5 ThecomparisonofeachTransgenictomatofruit 2003，l5(2)：533—543． 5【】MohamedZ，FuY，Chateigner—BoutinA L，eta1．Characterization 3 讨论与结论 oftheTomatoARF Gene Family UncoversaMulti-LevelsPost- TranscriptionalRegulationIncludingAlternativeSplicing[J]．Plos 本研究以番茄SIARF2基因为对象 。成功构建 One，2014，9(1)：1-12． 了Ls 尺 基因的超表达和反义抑制载体 ．并获得 [6】OkushimaY，MitinaI，QuachH L，eta1．AUXINRESPONSE 了相应 的转基 因植株作为后续分析材料 通过对 FACTOR2(ARF2)：apleiotropicdevelopmentalregulator[J]．Plant J，2oo5，43(1)：29—46． ．slARF2基因表达模式 的分析 ．发现 ．slARF2基 因 7【】EllisC M，NagpalP，YoungJC，eto1．AUXIN RESPONSE 的主要表达时期处于番茄的生殖生长阶段 ．从花芽 FACTOR1nadAUXIN RESPONSE FACTOR2regulatesenescence 开始贯穿于花 、果发育的整个过程中 通过对所得 andfloralorganabscissioninArabidopsis￡ JJ．Development， 2005．132(20)：4563-4573． 到的转基 因株 系材料的花 、果分析发现 ．SIARF2 [8]SchurffM CSpielman~ITiwaris，et以 TheAUXIN RESPONSE 基因在花蕾 中表达量最高 ．在开放仡中表达量也较 FACTOR 2 geneofArba idopsislinksauxin signalling,celldivision, 高．但对花的形成并没有产生明显的影响 在其他 andthesizeofseedsandotherorgans[J]．Development，2005， 133(2)：251-261． 研究中。拟南芥 arf2突变株系 中会表现 出花形态 9【】LiH，JohnsonP，StepanovaA，etrJ』．ConvergenceofSignaling 异常 ，开花延迟和花序长而密集的表型[51。因此 ， PathwaysintheControlofDifferentialCellGrowthni Ambi&~sis[J]． 为了明确 LslARF2基因在番茄花形成 阶段 的功能 ． DevCell，2004，7(2)：193—204． 还需要进一步对所得到的转基因植株开花时期的对 [10]RuzickaK，LjungK，VannesteS，eta1．Ethyleneregulatesroot gmwth Ⅱ effectson auxin biosynthesisnad trartsporl—dependent 应生理生化指标进行研究 auxindistribution[J]．PlantCell，2007，19(7)：2197—2212． 本研究通过对转基因植株的SlARF2基因表达 [11】WangI，HuaD，HeJ，et ．AuxinResponseFactor2 (ARF2) 量 ．结实率以及成熟后果实的统计分析．发现各植 na d Its Regulated Homeodomain Gene HB33 Mediate Abscisic AcidResponseinArabidopsis[J]．PlosGenet，2011，7(7)：l-14． 株 的结实率 、果实大小和重量与 基因的表 [12】VertG，WalcherCL，ChoryJ，eta／．Integrationofauxinand 达量呈 明显的线一E)．S 尺 基 因表 brassinosteroidpathwaysbyAuxinResponseFactor2J[I．PNAS， 达量越高则结实率越高．成熟后的果实则越小 ．这 2008，105(28)：9829—9834． f13】ChaabouniS．JonesB，DelalandeC，eta1．SI—IAA3．atomato 与a~2突变株系在拟南芥 中导致花不育的结果吻 Aux／lAA atthecrossroadsofauxinandethylenesignallinginvolved 合 推测 S 兄 的表达可能直接影响番茄果实 indifferentialrgowth[J]．JExpBot，2009，60(4)：l349—1362． 的形成和发育 S RF2基因对 于植物果实结实率 【14]LnS，

　　爱在日落黄昏时Before.Sunset.2004中英表格台词剧本.pdf

　　【三菱】FX3S FX3G FX3GC FX3U FX3UC系列PLC用户手册MODBUS通信篇（较新）.pdf

　　原创力文档创建于2008年，本站为文档C2C交易模式，即用户上传的文档直接分享给其他用户（可下载、阅读），本站只是中间服务平台，本站所有文档下载所得的收益归上传人所有。原创力文档是网络服务平台方，若您的权利被侵害，请发链接和相关诉求至 电线) ，上传者